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          實驗室廠家首頁 > 實驗臺技術資料 > pcr實驗室設計圖
          pcr實驗室設計圖
          編輯 :滬杰實驗室廠家 時間 : 2020-05-16 20:42 瀏覽量 : 32

          這里不僅給了幾組pcr實驗室設計圖更詳細說明了PCP圖紙為何是這么設計的及整個PCR流程圖。

          要完成一組PCR實驗,通常需要經過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產物分析4個實驗過程。

          這4個實驗過程的實驗用房應相鄰布置,組成一個獨立的PCR實驗區。標準的PCR實驗區包括:試劑準備區、標本制備區、擴增區、產物分析區、各區配套的緩沖區及公共走廊。

          PCR實驗室整體平面布局圖

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          圖表1、某醫院PCR實驗室平面圖

          試劑準備區


          該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。

          試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。

          試劑準備區配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,計算冷負荷時,需要將它們計算在內。

          房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區的壓力梯度要求為:相對正壓狀態,以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染。

          標本制備區

          該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。

          標本制備區配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,計算冷負荷時,需要將它們計算在內。在標本制備區,還需要配備生物安全柜,用于進行提取核酸的操作。

          為避免提取的核酸在柜內反復循環,造成標本之間的交叉污染,出現假陽性結果,該區域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區垂直氣流全部來自實驗室,排風經過高效過濾器過濾后直接排至室外,不允許回到安全柜和實驗室中。

          根據經驗,如果實驗室內配備生物安全柜,每配備一臺,實驗室的面積增加10m2;標本制備區的面積宜在25m2~30m2之間。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。

          擴增室

          該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。

          在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開反應管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進行。

          擴增室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀,本文實例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

          在實驗室建造過程中,需要給PCR儀配備專門的UPS電源,以保證其正常工作。該區面積控制在15m2~20m

          本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。建議采用5~10Pa壓差,在控制上比較容易實現。


          產物分析區

          該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。

          在室內配備通風櫥,保證房間內的相對負壓,空氣從室外流向室內。該區面積控制在15m2~20m2。

          本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。建議采用5~10Pa壓差,在控制上比較容易實現。

          正負壓區域緩沖室的設置

          根據壓力梯度的要求,試劑配制室和樣品處理室為相對正壓,擴增室和產物分析室為相對負壓,要求正壓的區域和要求負壓的區域的緩沖室內的壓力設計大不相同。

          正壓緩沖室符合一般正壓潔凈室的緩沖原則,主要是防止室外環境空氣中的氣溶膠進入室內。正壓緩沖室的布置如圖2所示。


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          圖表2、正壓緩沖室的布置圖

          負壓緩沖室則是要求緩沖室對核酸擴增室及產物分析區保持正壓,對緩沖室外也保持正壓(主要是滿足室內凈化需要,如室內無潔凈要求,此處可以為0壓)。負壓緩沖室的布置如圖3所示。

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          圖表3、負壓緩沖室的布置圖

          污染的預防與控制

          PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。

          工作區域的嚴格劃分,各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。

          合理的系統設置,合理的空調通風系統設置,盡量采用全送全排的空調系統;嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。

          規范的操作,臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區進行清潔。

          嚴格的管理:嚴格控制進出實驗室的人員。在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域;盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。擴增產物分析區是最主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等;

          總之,實驗室建設是一個復雜的問題,這里不討論人員的問題,實驗室人員的培養與沉淀,也需要一個過程,在建設的過程中要因地制宜,不要生搬硬套,結合自己的實際慢慢摸索出適合自己發展的建設思路??茖W合理建設實驗室,更好的發揮實驗室的作用。

          參考資料:

          [1] 中華人民共和國住房和城鄉建設部,中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB50591-2010,潔凈室施工及驗收規范[S].北京:光明日報出版社,2010.

          [2] 許鐘麟.空氣潔凈技術原理(3版)[M].北京:科學出版社,2004.

          [3] 《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》(衛醫發[2002]10號).

          [4] 劉書慶,謝逢潔.質量管理體系建立與實施維護[J]工業工程,2003.

          [5] 2010年,衛生部辦公廳關于印發《醫療機構臨床基因擴增實驗室管理辦法》的通知

          《醫療機構管理條例》

          《醫療機構臨床實驗室管理辦法》

          《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》

          《醫療機構臨床基因擴增實驗室管理辦法》

          公司專業從事實驗室規劃,實驗室設計,實驗室規劃設計,實驗室裝修,實驗室裝修設計,全鋼實驗室家具,實驗室設備,化驗室操作臺,中央臺實驗臺,實驗室邊臺,中央實驗臺,通風柜,通風櫥,排毒柜,通風系統工程,通風系統,通風工程,凈化系統工程,凈化工程,凈化設備,凈化系統,通風設備等。

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